要:本文采用液相色譜儀對(duì)飼料中的三聚氰胺進(jìn)行檢測(cè),建立了飼料中三聚氰胺的液相色譜法,zui小檢測(cè)濃度達(dá)0.01mg/kg,回收率>80%,峰面積的RSD為0.275% ,有良好的線性關(guān)系(r=1.00000),具有快速、準(zhǔn)確、等特點(diǎn)。
三聚氰胺,簡稱三胺,分子式C3N6H6,是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素,而普通的全氮測(cè)定法測(cè)飼料和食品中的蛋白質(zhì)含量時(shí)不能排除這類偽蛋白氮的干擾,因而一些廠商為了能降低成本而添加這種化工原料,以提高產(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量。《化學(xué)品安全手冊(cè)》第三卷和化學(xué)品安全卡片說明:長期或反復(fù)大量攝入三聚氰胺可能對(duì)腎與膀胱產(chǎn)生影響,導(dǎo)致產(chǎn)生結(jié)石。奶粉中相繼查出含大量的三聚氰胺,不由讓我們對(duì)飼料中是否含有三聚氰胺,產(chǎn)生質(zhì)疑。本文采用浙江福立分析儀器有限公司生產(chǎn)的FL2200液相色譜儀建立飼料中三聚氰胺快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。
1、 材料和方法
1.1 主要儀器和試劑
液相色譜儀;
高速離心機(jī)(10000r/min);
超聲波震蕩儀;
渦旋混合器;
分析天平(萬分之一);
溶劑過濾器(帶0.45um有機(jī)、水系過濾膜和真空泵);
乙腈(HPLC級(jí));
三聚氰胺(≥99.0%);
檸檬酸(分析純);
辛烷磺酸鈉(色譜級(jí));
三錄乙酸(優(yōu)級(jí)純);
乙酸鉛(優(yōu)級(jí)純);
水(二次蒸餾水以上);
稀釋液:50%甲醇水溶液;
1.2 色譜條件:
色譜柱 Venusil ASB C8 4.6*250mm 5um
流動(dòng)相 乙腈:10mM/L檸檬酸+10mM/L辛烷磺酸鈉緩沖液=10:90(pH=3.0)
檢測(cè)波長 240nm
柱溫 40℃
流速 1ml/min
進(jìn)樣量 20uL
2、實(shí)驗(yàn)部分
2.1三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
準(zhǔn)確稱取三聚氰胺標(biāo)樣100.0mg ,放于25ml燒杯中,加稀釋液20ml超聲波溶解1分鐘,然后轉(zhuǎn)移到100ml的容量瓶中,用稀釋液清洗燒杯5次,每次10ml,然后把清洗后的稀釋液全部轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中,用稀釋液定容100ml,即得濃度為1000mg/L三聚氰胺標(biāo)樣溶液。
準(zhǔn)確量取濃度為1000mg/L三聚氰胺標(biāo)樣溶液50ml,用流動(dòng)相定容至500ml,即得濃度為100mg/L的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液。
分別準(zhǔn)確量取濃度為100mg/L的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液0.8ml、2ml、20ml、40ml、80ml、放于100ml的容量瓶中,用流動(dòng)相定容100ml,得濃度為0.8mg/L、2mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液,過0.45um的有機(jī)過濾頭過濾,保存待測(cè)。
2.1.1 重復(fù)性測(cè)定
取濃度為80.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液,重復(fù)進(jìn)樣3次,測(cè)定結(jié)果見表1,色譜圖見圖1。
2.1.2 線性試驗(yàn)
取濃度為0.8mg/L、2mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、50mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品分別作樣,繪制濃度-峰面積的曲線。實(shí)驗(yàn)表明:三聚氰胺在0.8-80.0mg/L間,有良好的線性,見圖2。
可得:W=-0.037868+0.000011*A;R2=1.00000
2.1.3 三聚氰胺zui小檢測(cè)濃度
在上述試驗(yàn)條件下,以3S/N為zui小檢測(cè)濃度,三聚氰胺的zui小檢測(cè)濃度為0.01mg/kg
2.2空白實(shí)驗(yàn)
稱取5.00g純凈水于100ml錐形瓶中,加入50ml三錄乙酸溶液(1%)和2ml乙酸鉛溶液(22g/L),搖勻,超聲提取20min。靜置2min,取上層清液30ml,10000r/min離心10min。取上清液10ml做待凈化液。
(以下流速控制<1.00ml/min)
搭好固相萃取裝置,接上混合型陽離子交換固相萃取柱,向小柱中加入3ml甲醇,抽至近干,加入3ml水活化,抽至近干,將凈化液緩慢轉(zhuǎn)移至固相萃取柱,抽至近干,加3ml水洗滌,抽至近干,加3ml甲醇洗滌,抽至近干,換成收集管,加入6ml氨化甲醇溶液洗脫,把收集的收集液于55℃下氮?dú)獯蹈?,殘留物?ml流動(dòng)相溶解,渦旋混合2min,超聲波2min,0.45um過濾頭過濾。
在上述色譜條件下進(jìn)樣,結(jié)果未出峰。
2.3 樣品前處理與測(cè)定
隨機(jī)抽取市面上的飼料,進(jìn)行處理分析。
稱取5.00g試樣于100ml錐形瓶中,加入50ml三錄乙酸溶液(1%)和2ml乙酸鉛溶液(22g/L),搖勻,超聲提取20min。靜置2min,取上層清液30ml,10000r/min離心10min。取上清液10ml做待凈化液。
(以下流速控制<1.00ml/min)
搭好固相萃取裝置,接上混合型陽離子交換固相萃取柱,向小柱中加入3ml甲醇,抽至近干,加入3ml水活化,抽至近干,將凈化液緩慢轉(zhuǎn)移至固相萃取柱,抽至近干,加3ml水洗滌,抽至近干,加3ml甲醇洗滌,抽至近干,換成收集管,加入6ml氨化甲醇溶液洗脫,把收集的收集液于55℃下氮?dú)獯蹈?,殘留物?ml流動(dòng)相溶解,渦旋混合2min,超聲波2min,0.45um過濾頭過濾。
2.4 回收率實(shí)驗(yàn)
稱取5.00g試樣于100ml錐形瓶中,分別加入濃度為2mg/L三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml、2ml、3ml;分別加入濃度為20mg/L三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml、2ml、3ml;分別加入濃度為40mg/L三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml、2ml、3ml,然后依次加入49、48、47ml三錄乙酸溶液(1%)和2ml乙酸鉛溶液(22g/L),搖勻,超聲提取20min。靜置2min,取上層清液30ml,10000r/min離心10min。取上清液10ml做待凈化液。
(以下流速控制<1.00ml/min)
搭好固相萃取裝置,接上混合型陽離子交換固相萃取柱,向小柱中加入3ml甲醇,抽至近干,加入3ml水活化,抽至近干,將凈化液緩慢轉(zhuǎn)移至固相萃取柱,抽至近干,加3ml水洗滌,抽至近干,加3ml甲醇洗滌,抽至近干,換成收集管,加入6ml氨化甲醇溶液洗脫,把收集的收集液于55℃下氮?dú)獯蹈?,殘留物?ml流動(dòng)相溶解,渦旋混合2min,超聲波2min,0.45um過濾頭過濾。
3、 結(jié)論
試驗(yàn)證明:采用液相色譜儀測(cè)定飼料中的三聚氰胺,具有檢測(cè)靈敏度高、精密度高、準(zhǔn)確度高、線性范圍好和回收率高等優(yōu)點(diǎn),*符合分析要求,適合各類飼料中三聚氰胺的快速檢。(色譜儀器網(wǎng))